| “戏精”的诞生与陨落——让您的样品免受RNase的干扰 世界戏剧日-伯豪生物
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March 27,2018
世界戏剧日
RNAextraction
一千个实验汪手中,有一万种RNA条带
——Xiaohao Shakespeare
做过RNA抽提的小伙伴,对RNA酶一定不陌生,
因为党昊,
大家一定被这枚“戏精”深深地虐过方美芳。
它无处不在,周围的空气中,你的呼吸中,实验器具中,就连实验材料的组织中,也存在着大量的RNA酶。
稍不注意,在它的“即兴表演”下,你的RNA条带分分钟玩起了变形,玩起了消失...
在普通实验室曹继敏,RNA电泳是鉴定所提取的RNA完整性的简单,快速,常用的方法
完整RNA电泳图
1)完整的RNA通常会有三条带,有的也会两条带(有些试剂盒提取的时候会过滤掉5S条带)
2)最亮的条带为28S条带,其次为18S条带,最淡条带为5S条带;28S条带亮度应为18S条带亮度的2倍左右。
但是,我们的电泳图往往会变成下面这样:
1.RNA条带降解
降解可能出现在提取过程或电泳过程。建议:
1)在RNA提取过程中,应严格操作,全程避免RNA酶的污染,同时保证组织材料的新鲜。
2)在电泳时,应换用新鲜的电泳液紫云祥,新制备的凝胶,田宸羽同时应较高电压短时间电泳(20 min)。
2.RNA条带弥散
出现条带弥散的原因:RNA被核酸酶降解;电压或电流过大;上样量过高或过低等。建议:
1)应避免上述RNA降解出现的问题。
2)控制电压勿过高或过低,一般5—8 V/cm即可;避免电泳时间过长。在电泳开始的前几分钟建议使用低电压。
3.点样孔发亮
1)RNA样品的污染(含有杂质,如蛋白的残留,可能的原因为RNA提取过程中的操作问题:如氯仿加入量过少,不能充分变性蛋白;氯仿加入量过多,使DNA和蛋白进入水相,影响RNA的提取质量)。
2)胶的问题:如未能凝固好,RNA样品无法很好的往前涌动,同时上样量可能过大。
4.出现多条带
1)RNA降解。提取过程中出现降解或电泳过程中出现降解(可能性较小)。2)上样量过大。RNA由多种类型组成,若上样量过大则会导致各种类型的RNA(tRNA,mRNA等)均会出现条带喷嚏大魔怪。
每每看到这种妖魔鬼怪般的条带时...
RNA宝宝非常脆弱脆弱,
很容易就会被无所不在的RNase降解,
轻轻松松的就让实验汪的种种努力付之东流。
尤其是当样品极其稀少且珍贵时,
反复冻融几次之后,
RNA的降解更是让各位小伙伴们想自挂东南枝。
送样品时,一遇到炎热的天气、各种购物节快递延误热潮全职业米虫,
担心的心都提到了嗓子眼,
为了保护好RNA分子,必须把RNase给KO掉。
下面小豪给大家推荐的这款产品,用过的小伙伴都说:
“为什么没有早点遇见她!君主蛇!!”
伯豪生物RNAsafetyTM组织RNA保存液是一种无毒的可直接使用的样品保存液解学士,其原理是抑制RNase活性鹏金所,保护新鲜组织样本里的 RNA免受降解。本产品目前已被中科院上海生命科学研究院、国家基因组南方研究中心、上海交通大学医学院、中国医科大学、哈尔滨医科大学、汕头大学医学院、唐都医院、江南大学等单位广泛使用。
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